Le principe de la digital PCR (Polymerase Chain Reaction)

Extraits de l'étude de cas

[...] Comme, par exemple, l'étape de dispersion demande de la rigueur pour plusieurs paramètres afin de ne pas affecter les résultats : la taille des compartiments, la capacité de débit (nombre de compartiments), la stabilité thermique de la réaction et la vitesse de dispersion. La dPCR, pour son utilisation, demande un matériel très coûteux et très complexe. De plus, les thermocycleurs (permettant les cycles répétés) demandent une consommation élevée en énergie très importante. Il est à noter, actuellement, le matériel nécessaire pour une digitale PCR n'est pas facilement disponible. L'utilisation d'une dPCR requiert, généralement, un volume important de réactif, afin de pouvoir procéder à la partition multiple. Ceci est considéré comme conséquent économiquement. V. [...]

[...] Disponibilité sur : https://www.youtube.com/watch?v=Z_dn6Oz-uaA Figure 1 : La PCR conventionnelle est une mesure extrapolée d'acides nucléiques à partir de modèles déjà mesurés, peu précise. La dPCR est une mesure «numérique» des acides nucléiques quantitativement. Figure 2 : Les étapes clés de la dPCR sont indispensables à son bon fonctionnement. Figure 3 : Face à une forte concentration d'inhibiteur, la PCR conventionnelle (Real-Time) est peu efficace tandis que la dPCR a un seuil de tolérance plus important. Figure 4 : Un exemple de thermocycleur de la dPCR. [...]

[...] La digitale PCR reste la plus rapide, efficace et simple à manipuler à ce jour. Même si elle doit encore faire ses preuves afin d'être utilisée systématiquement en laboratoire. Nous pourrions par la suite nous imaginer une dPCR améliorée dans un monde comme le nôtre sans cesse en développement. Celle-ci aurait un moindre coût afin d'accélérer l'avancée de la science pour les applications biomédicales par exemple. Références - CAO et al. Biosensors and bioeletronics, Science Direct [en ligne] [décembre 2017]. [...]

[...] Aujourd'hui, la dPCR suscite un intérêt conséquent pour la recherche. En effet, elle présente de nombreux avantages comparés aux anciennes techniques PCR comme sa justesse, sa performance et sa clarté. Un échantillon contenant, bien évidemment, de l'ADN est reparti dans des milliers de partitions individuelles afin d'obtenir l'échelle du nano. Il existe diverses méthodes concernant la dispersion de l'échantillon comme : à base de gouttelettes, à base de canaux, à base de billes d'hydrogel, etc. Néanmoins, cette technique d'amplification est très complexe comme nous allons le constater tout au long de cette revue. [...]